应广大科研人员将非损伤微测技术(NMT) 实验写入国自然基金申请书的需求，编辑部整理了《NMT 实验方法撰写指南》、《实验费用核算方法》，方便科研人员撰写申请书。同时，还提供了人工协助途径，便于充分交流研究思路，让NMT 更全面、深入地服务于科研人员的经费申请、科研创新工作。

1. 探究耐盐材料的耐盐机制，是否与盐胁迫下，SOS1，即质膜Na⁺-H⁺逆向转运体活性强，引起的细胞排Na⁺强有关。排Na⁺速率越大，代表SOS1活性越强。

2. 探究耐盐材料的耐盐机制，是否与盐胁迫下，NHX1，即液泡膜Na⁺-H⁺逆向转运体活性强，引起的液泡区隔Na⁺强有关。吸Na⁺速率越大，代表NHX1活性越强。该研究主要以研究茎、叶的液泡为主。

3. 探究耐盐材料的耐盐机制，是否与盐胁迫下质膜H⁺-ATPase 活性强有关。质膜H⁺-ATPase 向细胞外、根外泌H⁺，形成H⁺电化学梯度，驱动次级转运体对各种营养物质、离子的转运。还可以有效抑制盐碱胁迫引起的根际碱化，降低pH，促进根生长。

4. 探究盐胁迫下植物的保钾能力，K⁺外排越小，保钾能力越强。进一步探究耐盐材料的保钾机制，是否与GORK（外向K⁺通道）的调控有关。盐胁迫下，保钾能力越强，即K⁺外排越小，且H⁺外排相对较大，代表该耐盐材料在盐胁迫下，通过提升质膜H⁺-ATPase 活性，加大向胞外排H⁺，缓解因盐胁迫引起的质膜去极化，从而抑制质膜去极化激活的GORK，减少K⁺外排，实现保钾。

5. 检测盐胁迫下根、茎、叶细胞的Ca²⁺实时跨膜吸收速率。

6. 利用Ca²⁺通道抑制剂，验证耐盐材料较强的SOS1活性、保K⁺能力、H⁺-ATPase 活性，是否与其盐胁迫跨膜Ca²⁺信号强度较大相关。

7. 探究耐盐材料的耐盐机制，是否与盐胁迫下植物体内Na⁺转运过程中，HAK、HKT 参与的木质部Na⁺卸载以及SOS1参与的Na⁺装载有关。

8. 检测盐胁迫下，根实时吸收钠离子的速率。

1. 检测重金属胁迫下，根实时吸收Cd、Pb、As、Cu、Zn、Cr 等离子的速率。

2. 探究耐重金属材料的耐性机制，是否与重金属胁迫下，液泡区隔重金属离子能力强有关。液泡吸收重金属离子的速率越大，代表液泡区隔能力越强。该研究主要以研究茎、叶细胞的液泡为主。

3. 探究耐重金属材料吸收更少的重金属，是否与耐性材料分泌更多的酸，与根际重金属发生沉淀、络合等作用，从而降低根际重金属的生物有效性及吸收转运效率有关。

4. 检测重金属胁迫下，根部H₂O₂的转运速率。

5. 通过检测木质部组织细胞装载重金属离子的速率，探究重金属胁迫下，植物将根吸收的重金属离子，转运到地上部分的能力。木质部组织吸收重金属离子的速率越大，代表该材料往地上部分转运重金属离子的能力越强。

1. 检测根实时吸收NH₄⁺、NO₃^-、HPO₄^2-、K⁺、Mg²⁺、Fe²⁺速率。

2. 探究氮高效材料的氮高效吸收利用机制，是否与该材料的质膜H⁺-ATPase 活性强，通过向胞外排H⁺，在质膜表面形成有效的H⁺电化学梯度，提升NH₄⁺、NO₃^-吸收效率，同时有效地将胞内NH₄⁺同化产生的H⁺及时排出胞外，维持胞内环境pH 稳态有关。

3. 探究低氮或低钾环境下，氮钾高效材料的氮钾高效利用机制，是否与该材料细胞，将更多的NH₄⁺、NO₃^-、K⁺分配到胞浆有关。根、茎、叶的液泡排NH₄⁺、NO₃^-、K⁺相对较强，或吸NH₄⁺、NO₃^-、K⁺相对较弱，代表该材料可能是通过该机制提升氮钾利用率。

4. 探究高铵胁迫下，耐高铵材料的耐性机制，是否是通过根，将更多的NH₄⁺排到根外。

1. 检测干旱或水淹胁迫下的Ca²⁺实时跨膜吸收速率。

2. 湿地植物根际细菌的生存环境受其根系径向泌氧(ROL) 的调控，湿地植物根系径向泌氧是构造根际氧化- 还原异质微生态系统的核心要素，其扩散层为好氧、厌氧微生物提供了良好生境并促进其代谢活动，使湿地植物根际成为有机物降解、物质循环及生命活动最为强烈的场所，这一过程影响与甲烷排放（减碳）、湿地水体污染物降解、植物耐低氧密切相关。NMT 通过检测根系“实时根系径向泌氧”（RT-ROL）及根际微区O₂梯度，可精确探究“根- 根际微生物”的作用机制。

3. 干旱胁迫初期，H⁺-ATPase 活性被抑制，组织细胞正常生长时的泌H⁺过程被抑制，即H⁺ 外排减小或转变为H+吸收。植物在适应干旱，例如促进干旱胁迫下根系生长的过程中，H⁺-ATPase 被激活，H⁺外排增强，可用于验证植物耐旱机制，是否与根系H⁺-ATPase 活性强有关。此外，研究发现，根系向水生长过程中，根的高渗一侧H⁺-ATPase 活性相比低渗一侧强，细胞壁酸化强烈，根细胞生长更快，引起根部向低渗一侧弯曲生长。

4. 干旱胁迫下，维持渗透压稳定可以减少水分流失，而K⁺是维持细胞渗透压的重要组分。K⁺的跨膜转运调控，对于植物抗旱起到重要作用。

5. 植物可以通过调节气孔大小，促进光合作用，同时减少蒸腾损失，提升植物抗旱能力。气孔主要是由保卫细胞组成，当保卫细胞体积增大时，气孔被撑开，反之则气孔关闭。保卫细胞体积受保卫细胞胞浆的渗透压调节，而渗透压主要受胞浆中的离子、糖分等浓度的影响。这其中，K⁺、Cl^-、NO₃^-是直接影响保卫细胞渗透压的最重要几种离子，并且K⁺、Cl^-、NO₃^- 跨膜进出保卫细胞过程，受胞浆的Ca²⁺ 浓度和pH（H⁺）调控。定量检测上述这些离子跨膜进出保卫细胞的过程，可深入揭示植物气孔开闭的微观调控机制。

1. 检测植物模式免疫引起的根、茎、叶细胞的Ca²⁺实时跨膜吸收速率。

2. 检测植物效应免疫过程中，Ca²⁺泵的作用。

3. 稻瘟病通过影响钾通道抑制植物K⁺吸收促进其侵染的机制。

4. 植物在响应昆虫胁迫过程中的Ca²⁺信号调节。

1. 检测高温或低温胁迫下的Ca²⁺实时跨膜吸收速率。

2. 检测低温胁迫对植物根系吸收矿质离子的影响。

1. 花粉管、根毛细胞、棉纤维细胞等极性生长过程中，胞内需维持稳定的Ca²⁺浓度梯度。生长点与非生长点的跨膜Ca²⁺流入/ 流出及速率差异，是维持胞内Ca²⁺浓度梯度的重要因素。

2. 花粉管等极性生长过程中，胞内需维持稳定的pH 梯度。生长点与非生长点的跨膜H⁺流入/ 流出及速率差异，是维持胞内pH梯度的重要因素。

NMT可定量检测IAA的实时转运过程，同时可以检测基于“酸生长假说”的IAA调控的质膜H⁺-ATPase排H⁺。

H⁺-ATPase 被称为植物的“ 主宰酶”，极其重要。根部细胞的质膜H⁺-ATPase，通过调控植物往胞外、根外排H⁺，调节根表pH，维持根的生长、应对各类环境胁迫，如缓解盐碱胁迫引起的根际pH 升高，酸化细胞壁促进干旱胁迫下的根伸长、向水性生长；而且可以在细胞表面、根表面形成H+ 电化学梯度，驱动次级转运体对各种营养物质、离子的转运，包括促进氮、磷、铁等养分元素的吸收，促进过度积累的Na⁺、NH₄⁺ 等离子的外排；还可以有效抑制盐碱胁迫引起的根际碱化，降低pH，促进根生长。

1. 检测盐碱、干旱、重金属、高低温等非生物胁迫，以及病原微生物或分子模式抗原等生物下，根、茎、叶细胞的Ca²⁺实时跨膜吸收速率。

2. 花粉管、根毛细胞、棉纤维细胞等极性生长过程中，胞内需维持稳定的Ca²⁺浓度梯度。生长点与非生长点的跨膜Ca²⁺流入/ 流出及速率差异，是维持胞内Ca²⁺浓度梯度的重要因素。

3. 研究抗病组（缓解组）与对照组的根、叶片、果实的Ca²⁺转运差异。

定量检测H₂O₂的实时转运过程。

气孔主要是由保卫细胞组成，当保卫细胞体积增大时，气孔被撑开，反之则气孔关闭。保卫细胞体积受保卫细胞胞浆的渗透压调节，而渗透压主要受胞浆中的离子、糖分等浓度的影响。这其中，K⁺、Cl^-、NO₃^-是直接影响保卫细胞渗透压的最重要几种离子，并且K⁺、Cl^-、NO₃^-跨膜进出保卫细胞过程，受胞浆的Ca²⁺浓度和pH（H⁺）调控。定量检测上述这些离子跨膜进出保卫细胞的过程，可深入揭示植物气孔开闭的微观调控机制。

1. Nature Clim Change 中科院黄海水产所叶乃好：NMT钙流为气候变化导致冰藻运动能力下降提供信号调节证据

2. Physiol Plantarum 中科院海洋所王广策：大叶藻同时测量H⁺和O₂流速及其生理意义

3. J Appl Phycol 集大谢潮添：NMT发现H₂O₂和Ca²⁺调控坛紫菜排Na⁺保K⁺应答盐胁迫

1. Nat Cell Biol：NMT 发现神经元线粒体耗O₂速率增加为Bcl2家族改善神经元代谢提供直接证据

2. J Biol Eng 普渡大学：哺乳动物脊髓损伤诱导Ca²⁺显著吸收 干扰Ca²⁺介导的离子电流或可作为缓解继发性损伤的手段之一

3. Arch of Biochem and Biophys：NMT揭示近视小鼠睫状肌K⁺稳态被破坏致微环境紊乱

1. Chemosphere：NMT发现氨暴露致斑马鱼毛细胞Ca²⁺和NH₄⁺吸收减少

2. Aquat Toxicol：银铜纳米颗粒对斑马鱼胚胎侧线毛细胞的毒性作用

本研究报告旨在为有志于依托旭月非损伤微测技术（NMT）、动态离子分子组学（imOmics）科学理论以及全球离子分子组计划（GiP）战略框架的科研工作者，提供一份系统、深入的国家自然科学基金（NSFC）项目申请指南。在当前NSFC 日益强调原始创新、学科交叉与服务国家战略需求的背景下，将NMT 这一前沿技术平台、imOmics 这一颠覆性理论范式、以及GiP 这一掌握国际科技话语权的宏大计划三者有机结合，构建了一个从实验方法、科学理论到战略价值层层递进的“创新三位一体”申请逻辑。本指南详细剖析了NSFC 的研究项目系列、人才项目系列和环境条件项目系列三大资助格局，并针对各系列下的不同项目类型（如面上项目、青年科学基金、重大科研仪器研制项目等），提出了具体的申请策略、撰写要点和创新思路。通过图文并茂的方式，本报告力求为申请人提供兼具战略高度和实践操作性的指导，助力其在激烈的基金竞争中脱颖而出，推动我国生命科学研究实现从“静态解码”到“动态调控”的跨越，并最终在全球科技舞台上扮演引领者角色。

本指南旨在为国家自然科学基金（NSFC）的申请者提供一份前瞻性、系统性的战略框架。当前，生命科学及相关交叉学科正经历从“静态描述”到“动态调控”的范式革命。本指南以三大支柱为核心：旭月非损伤微测技术（NMT） 作为国际领先的原创性技术平台，imOmics（动态离子分子组学） 作为突破性的科学理论框架，以及GiP（全球离子分子组学计划） 作为掌握全球科技领域话语权的国家级战略。通过将这三者有机结合，申请者能够显著提升项目的前沿性、创新性和战略价值。本指南将详细阐述如何在基础科学、技术科学、生命与医学、交叉融合四大科学部板块中，构建基于NMT、imOmics 和GiP 的创新性研究课题，并提供了具体的研究方向、设计思路和图文示例，旨在最大限度地提高NSFC 项目的申请成功率，并推动我国在相关领域的原始创新和国际引领。

本报告旨在为科研工作者提供一份全面的国家自然科学基金及其他相关科研项目申请指南。报告聚焦于如何有效利用三大核心要素——旭月NMT 非损伤微测技术（作为前沿创新技术平台）、imOmics 动态离子分子组学（作为颠覆性科学理论新突破）和GiP 全球离子分子组计划（作为掌握科技领域国际话语权的战略布局），来构建具有强大竞争力的研究方案。本指南将从“按研究性质”和“按项目等级与管理主体”两个关键维度，系统阐述如何根据不同基金的定位和要求，精准地设计研究内容、凸显创新性与战略价值，从而显著提升项目申请的成功率。报告通过深度分析和图表解析，力求为研究人员提供一套实用、清晰且具有前瞻性的申请策略框架。