《NMT 通讯》第二期
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一、实验目的
了解小鼠胃黏膜泌酸腺氢离子检测方
法。
二、材料用具及仪器药品
检测样品：小鼠胃体黏膜
检测仪器：非损伤微测系统（科研平台）或
非损伤微测系统（研发平台）
使用耗材：NMT 专用固体
H
+
流速传感器
所需药品：
141.8 mmol·L
-1
NaCl, 5.9 mmol·L
-1
KCl, 1.2 mmol·L
-1
MgCl
2
, 10 mmol·L
-1
HEPES
acid, 5.6 mmol·L
-1
Tris, 2.56 mmol·L
-1
CaCl
2
,
2 g glucose, pH 7.4. 100 mmol·L
-1
组胺，
300
mmol·L
-1
西咪替丁。
用具：体视显微镜，硅胶板，培养皿，
CO
2
，移液枪，枪头若干。
三、原理
胃黏膜主要由分泌胃酸的壁细胞、分泌
胃蛋白酶原的主细胞和分泌黏液的黏液细胞
构成，这些细胞相互协调共同参与胃内的消
化过程。胃酸（
HCl
）来源于壁细胞，是通
过壁细胞顶端膜及基底膜的多种转运蛋白和
离子通道协同作用产生。在刺激状态下，壁
细胞顶膜侧的
H
+
/K
+
-ATPase
、
Cl
-
分泌通路
实验体系：小鼠胃黏膜氢离子分泌率检测
郑丽飞
*
、朱进霞
首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系，100069
* 通讯作者
E-mail:13581582937@163.com
电话：
13581582937
郑丽飞：博士、副教授、硕士生导师，撰稿；朱进霞：博士、教授、博士生导师，修订。
通讯地址：北京市丰台区右安门外西头条 10 号
新手上路
和
K
+
循环通路以及基侧膜的
Cl
-
吸收通路共
同参与胃酸的分泌过程。组胺可刺激胃酸分
泌，通过与壁细胞膜上的特异性受体结合，
引起细胞内
cAMP
水平增高，使细胞膜上的
离子通道和转运蛋白活化，从而增加
HCl
的
分泌。
四、方法步骤
1
、离体胃体黏膜组织制备：小鼠吸入
二氧化碳进行安乐死。取出胃，保留胃体，
沿胃大弯侧剪开胃体，清洗后在放置在硅胶
板上固定、在体式显微镜下分离黏膜层。
2
、将胃体黏膜放入盛有
5mL
测试液的
培养皿中固定平衡
30min
。
3
、更换测试液后放入
NMT
系统中检
测胃体黏膜腔面膜
H
+
流速。
4
、瞬时加入终浓度为
100mM
组胺，继
续检测
H
+
流速
10min
。
5
、再加入终浓度为
300mM
西咪替丁，
并继续进行
H
+
流速检测。
收稿日期：
2022-12-22
《NMT 通讯》第二期
70
八、参考文献
[1]Zheng LF, Ji T, Guo ZH, Wang T, Xiu
XL, Liu XY, Li SC, Sun L, Xue H, Zhang
Y, Zhu JX(2020). Na
+
-K
+
-2Cl
-
cotransporter
2 located in the human and murine gastric
mucosa is involved in secretagogue-induced
gastric acid secretion and is downregulated
in lipopolysaccharide-treated mice. Eur
J Pharmacol 880,173162. doi: 10.1016/
j.ejphar.2020.173162.
五、实验报告
根据实验结果，解释加入组胺、西咪替
丁后
H
+
变化的生理现象及原理。
六、预期结果
胃体黏膜加入组胺处理之后，
H
+
分泌
增强；进一步加入西咪替丁后，
H
+
分泌逐
渐减小。
七、思考题
1. 为什么
NMT
能够快速检测到胃体黏
膜
H
+
流速？
答：
NMT
是一种超高灵敏度，非接触
方式、以流速为单位，检测材料外部离子分
子浓度及梯度的技术，能够快速的检测到样
品分子离子的变化。
2.
NMT
能否检测人工培养的壁细胞的
氢离子流速，与急性分离的胃黏膜组织检测
是否有区别？
答：可以检测人工培养的壁细胞。正常
生长的胃黏膜壁细胞和人工培养的壁细胞在
活性层面上会有所区别。正常生长的胃黏膜
壁细胞所反应出来的数据将会更贴近真实活
体的数据。
（责任编辑：李雪霏）
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