NMT非损伤微测技术实验分类标准流程(SOP)
生殖发育
花粉管
花粉管NMT实验SOP
适用指标:H+、Ca2+、K+、Cl-
流速传感器规格:细胞样品专用1-2 μm(XY-CGQ-02)
物镜倍数:10-20倍
采样规则:X-10
测试液配方: 0.5 mM CaCl2,0.5 mM KCl,0.1 mM MgSO4 1.0 mM H3BO3,15% (w/v)蔗糖,0.1 mM HEPES,pH7.5
所需物品:直径35 mm培养皿、固定样品玻片(XY-BP)
实验步骤:
1实验准备:将体外萌发好的花粉管吸附在多固定样品玻片。
(1)将固定样品玻片置于35 mm培养皿底部。
(2)取体外萌发好的花粉管悬液100 μL,滴至玻片上方,均匀摊开。
(3)室温静置10分钟后,用测试液将未吸附的花粉管洗去。
(4)加入4 mL测试液,静置平衡15分钟。
2样品检测:
(1)将平衡好的花粉管样品直接上样进行检测。
(2)检测位点:花粉管的表面各个位点均可
(3)检测时长:5-10分钟/点
(4)重复数:n≥8
参考文献:
1.Meng JG, Liang L, Jia PF, Wang YC, Li HJ, Yang WC. Integration of ovular signals and exocytosis of a Ca2+ channel by MLOs in pollen tube guidance. Nat Plants. 2020 Feb;6(2):143-153. doi: 10.1038/s41477-020-0599-1. Epub 2020 Feb 13. PMID: 32055051.
2.Zhang C, Xie P, Zhang Q, Xing Y, Cao Q, Qin L, Fang K. Low Concentration of Aluminum-Stimulated Pollen Tube Growth of Apples (Malus domestica). Plants (Basel). 2022 Jun 28;11(13):1705. doi: 10.3390/plants11131705. PMID: 35807657; PMCID: PMC9269008.
3.Chen T, et al. Combined proteomic and cytological analysis of Ca2+-calmodulin regulation in Picea meyeri pollen tube growth. Plant Physiology, 2009, 149: 1111 - 1126.
保卫细胞
气孔打开过程
气孔打开过程离子/分子跨膜转运速率
适用指标:H+、Ca2+、K+、Cl-
流速传感器规格:细胞样品专用1-2 μm(XY-CGQ-02)
物镜倍数:20-40倍
采样规则:Z-10
测试液配方:10 mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 1.0 mM MES, pH6.15
所需物品:直径35 mm培养皿、双面胶、软毛刷
实验步骤:
1实验准备:促气孔关闭
(1)摘取植株整片叶片,浸泡在溶液(1.0 mM MES, pH6.15)当中,避光处理30分钟,至气孔关闭。
(2)将处理好的叶片撕取下表皮备用。
(3)将撕下的下表皮一半用双面胶固定在35 mm培养皿底部,且下表皮内测面朝上。
(4)加入4 mL测试液,静置平衡10分钟。
2样品检测:
(1)将平衡好的保卫细胞样品直接上样进行检测,保持室内暗光。
(2)检测位点:气孔关闭的保卫细胞表面
(3)检测时长:5分钟/点
(4)瞬时开光并立即检测,光强≥20000勒克斯
(5)检测时长:10分钟
(6)重复数:n≥8
参考文献
1.Pei D, Hua D, Deng J, Wang Z, Song C, Wang Y, Wang Y, Qi J, Kollist H, Yang S, Guo Y, Gong Z. Phosphorylation of the plasma membrane H+-ATPase AHA2 by BAK1 is required for ABA-induced stomatal closure in Arabidopsis. Plant Cell. 2022 Apr 11:koac106.
2.Chen S, Wang X, Jia H, Li F, Ma Y, Liesche J, Liao M, Ding X, Liu C, Chen Y, Li N, Li J. Persulfidation-induced structural change in SnRK2.6 establishes intramolecular interaction between phosphorylation and persulfidation. Mol Plant. 2021 Jul 6:S1674-2052(21)00268-9.
3.Chang Y, Shi M, Sun Y, Cheng H, Ou X, Zhao Y, Zhang X, Day B, Miao C, Jiang K. Light-induced stomatal opening in Arabidopsis is negatively regulated by chloroplast-originated OPDA signaling. Curr Biol. 2023 Feb 18:S0960-9822(23)00151-3.
气孔关闭过程
气孔关闭过程离子/分子跨膜转运速率
适用指标:H+、Ca2+、K+、Cl-
流速传感器规格:细胞样品专用1-2 μm(XY-CGQ-02)
物镜倍数:20-40倍
采样规则:Z-10
测试液配方:50 mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 10 mM MES, pH6.15
所需物品:直径35 mm培养皿、双面胶、软毛刷
实验步骤:
1实验准备:促气孔充分打开
(1)摘取植株整片叶片,浸泡在测试液当中,光照(光照强度20000勒克斯)照射90分钟。
(2)将处理好的叶片撕取下表皮备用。
(3)将撕下的下表皮一半用双面胶固定在35mm培养皿底部,且下表皮内测面朝上。
(4)加入4 mL测试液,静置平衡10分钟。
视频资源:
2样品检测:(以ABA为例)
(1)将平衡好的保卫细胞样品直接上样进行检测。
(2)检测位点:气孔打开较大的保卫细胞表面
(3)检测时长:5分钟/点
(4)瞬时在检测样品培养皿中加入1 mL的ABA母液(5×ABA终浓度,50 mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 10 mM MES, pH6.15)
(5)检测时长:10分钟
(6)重复数:n≥8
视频资源:
参考文献
1.Pei D, Hua D, Deng J, Wang Z, Song C, Wang Y, Wang Y, Qi J, Kollist H, Yang S, Guo Y, Gong Z. Phosphorylation of the plasma membrane H+-ATPase AHA2 by BAK1 is required for ABA-induced stomatal closure in Arabidopsis. Plant Cell. 2022 Apr 11:koac106.
2.Chen S, Wang X, Jia H, Li F, Ma Y, Liesche J, Liao M, Ding X, Liu C, Chen Y, Li N, Li J. Persulfidation-induced structural change in SnRK2.6 establishes intramolecular interaction between phosphorylation and persulfidation. Mol Plant. 2021 Jul 6:S1674-2052(21)00268-9.
3.Chang Y, Shi M, Sun Y, Cheng H, Ou X, Zhao Y, Zhang X, Day B, Miao C, Jiang K. Light-induced stomatal opening in Arabidopsis is negatively regulated by chloroplast-originated OPDA signaling. Curr Biol. 2023 Feb 18:S0960-9822(23)00151-3.
当下状态
保卫细胞离子/分子跨膜转运速率
适用指标:H+、Ca2+、K+、Cl-
流速传感器规格:细胞样品专用1-2 μm(XY-CGQ-02)
物镜倍数:20-40倍
采样规则:Z-10
测试液配方:10 mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 1.0 mM MES, pH6.15
所需物品:直径35 mm培养皿、双面胶、软毛刷
实验步骤:
1实验准备:促气孔关闭
(1)摘取植株整片叶片,浸泡在溶液(1.0 mM MES, pH6.15)当中,光照(光照强度20000勒克斯)照射90分钟。
(2)将处理好的叶片撕取下表皮备用。
(3)将撕下的下表皮一半用双面胶固定在35 mm培养皿底部,且下表皮内测面朝上。
(4)加入4 mL测试液,静置平衡10分钟。
2样品检测:
(1)将平衡好的保卫细胞样品直接上样进行检测。
(2)检测位点:气孔关闭的保卫细胞表面
(3)检测时长:5-10分钟/点
(6)重复数:n≥8
参考文献
1.Pei D, Hua D, Deng J, Wang Z, Song C, Wang Y, Wang Y, Qi J, Kollist H, Yang S, Guo Y, Gong Z. Phosphorylation of the plasma membrane H+-ATPase AHA2 by BAK1 is required for ABA-induced stomatal closure in Arabidopsis. Plant Cell. 2022 Apr 11:koac106.
2. Chen S, Wang X, Jia H, Li F, Ma Y, Liesche J, Liao M, Ding X, Liu C, Chen Y, Li N, Li J. Persulfidation-induced structural change in SnRK2.6 establishes intramolecular interaction between phosphorylation and persulfidation. Mol Plant. 2021 Jul 6:S1674-2052(21)00268-9.
3. Chang Y, Shi M, Sun Y, Cheng H, Ou X, Zhao Y, Zhang X, Day B, Miao C, Jiang K. Light-induced stomatal opening in Arabidopsis is negatively regulated by chloroplast-originated OPDA signaling. Curr Biol. 2023 Feb 18:S0960-9822(23)00151-3.