叶H+-ATPase活性/排H+速率检测
经典案例
Aquat Toxicol南京地湖所谢丽强:NMT发现微囊藻毒素LR可破坏苦草根叶Ca/H平衡 从而影响营养物质积累
推荐实验设备
NMT耐盐机制分析仪(NMT300-SMP-YG/XY)
实验意义
探究耐盐材料的耐盐机制,是否与盐胁迫下质膜H+-ATPase活性强有关。质膜H+-ATPase向细胞外、根外泌H+,形成H+电化学梯度,驱动次级转运体对各种营养物质、离子的转运。
检测指标
H+
样品培养及处理
苗龄
苗龄无强制要求。该实验使用苗期样品较多,常见样品苗龄参考:
拟南芥:1~4周
水稻:1~5周
烟草:1~3周
杨树:4~7周
棉花:1~4周
培养方式
水培、琼脂培养基、土培、沙培均可。
实验处理
100~400 mM NaCl处理24小时。NaCl或Na2CO3+NaHCO3浓度与您该课题的其它实验胁迫浓度保持一致。常见样品胁迫浓度参考:
拟南芥、水稻、烟草:100~150 mM NaCl
棉花:200 mM NaCl
样品选取
1.植株选取
选取状态良好且外观形态在组内占主流的植株。
2.叶片选取
1)根据您的研究需求,选择植株上特定位置的叶片,例如从下往上数的第x片叶片。部分研究可能无此要求,同一研究的叶片选取标准需保持一致。
2)同一组内,叶龄、叶片颜色、大小尽量一致
3)优先完整无损伤的叶片
检测流程
前处理
1.从目标叶片上剪取1cm*1cm的叶片组织,揭去叶片组织的下表皮,暴露叶肉组织。如果叶片面积较小,直接用整片叶片。
叶片暴露叶肉组织
2.对折叶片,叶片下表面朝外,让暴露出叶肉组织处于外侧弯折面处,使用铝箔条将远离弯曲面的叶片组织条尾部夹住,使用样品固定专用树脂块将样品压在培养皿底部,露出叶片弯折处的叶肉组织。
叶肉细胞样品固定
3.加入测试液浸没叶片,静置2小时,不同规格的培养皿对应加入测试液体积:
35/60/90 mm培养皿,分别对应4/10/40 mL测试液。
样品前处理视频
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检测过程
1.检测位点:外侧弯曲面的叶肉组织上的任意一点
2.检测时长:5-10分钟
耗材清单
测试液:50 mM NaCl, 1.0 mM KCl, 0.2 mM MES, pH5.8
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检测参数
1.物镜倍数:4倍
2.采样规则:X-30
3.传感器--样品表面距离:5μm
参考文献
1.许越.非损伤微测技术—2022[J].NMT通讯,2023(01):3-9.DOI:10.5281/zenodo.8227586.
2. Qin R, Hu Y, Chen H, et al. MicroRNA408 negatively regulates salt tolerance by affecting secondary cell wall development in maize. Plant Physiol. 2023 Mar 2:kiad135. DOI: 10.1093/plphys/kiad135.
3. Solis C, Yong M, Zhou M, et al. Evolutionary Significance of NHX Family and NHX1 in Salinity Stress Adaptation in the Genus Oryza. Int J Mol Sci. 2022 Feb 14;23(4):2092. doi: 10.3390/ijms23042092.
4. Li S, Sun M, Miao L, et al. Multifaceted regulatory functions of CsBPC2 in cucumber under salt stress conditions. Hortic Res. 2023 Mar 15;10(5):uhad051. doi: 10.1093/hr/uhad051.