根保钾能力检测
经典案例
J Exp Bot 江苏师范大学:多倍体维持钠钾稳态促耐盐能力的新机制
推荐实验设备
NMT耐盐机制分析仪(NMT300-SMP-YG/XY)
实验意义
探究盐胁迫下植物的保钾能力,K+外排越小,保钾能力越强。
检测指标
K+
样品培养及处理
苗龄
苗龄无强制要求。该实验使用苗期样品较多,常见样品苗龄参考:
拟南芥:1~4周
水稻:1~5周
烟草:1~3周
杨树:4~7周
棉花:1~4周
培养方式
水培、琼脂培养基、土培、沙培均可,推荐使用水培和琼脂培养,其次是沙培和基质较松散的土培。
实验处理
100~400 mM NaCl处理24小时。NaCl或Na2CO3+NaHCO3浓度与您该课题的其它实验胁迫浓度保持一致。常见样品胁迫浓度参考:
拟南芥、水稻、烟草:100~150 mM NaCl
棉花:200 mM NaCl
样品选取
1.植株选取
选取状态良好且外观形态在组内占主流的植株。
2.根选取
1)主根或侧根均可,同一研究需保持一致,即都是主根或都是侧根
2)同一组内,根长、根直径、根颜色尽量一致
3)优先新生根或嫩根
检测流程
前处理
1.将盐碱处理后的样品取出,使用滤纸条和样品固定专用树脂块将样品的一条根,按压固定在培养皿底部。体积较小样品,可整株置于培养皿中;如体积较大,剪取目标根并固定好。
样品固定
2.加入测试液浸没根,静置30min,不同规格的培养皿对应加入测试液体积:
35/60/90 mm培养皿,分别对应4/10/40 mL测试液。
样品前处理视频
检测过程
1.检测位点:根伸长区。距离根尖顶点4d的位置,d=根直径
2.检测时长:5-10分钟
3.重复数:n≥8,即每组检测不少于8条根。如同一株样品有多条根符合检测要求,可在同一株上取不止1条根,一组内使用的植株数不可少于3株。
耗材清单
胁迫浓度<250 mM时测试液:150 mM NaCl, 1.0 mM KCl, 0.2 mM MES, pH5.8
胁迫浓度≥250 mM时测试液:300 mM NaCl, 1.0 mM KCl, 0.2 mM MES, pH5.8
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检测参数
1.物镜倍数:4倍(根直径≥200μm);10倍(根直径<200μm)
2.采样规则:X-30
3.传感器--样品表面距离:5μm
参考文献
1.许越.非损伤微测技术—2022[J].NMT通讯,2023(01):3-9.DOI:10.5281/zenodo.8227586.
2. Wang J, Cai C, Geng P, et al. A New Discovery of Argon Functioning in Plants: Regulation of Salinity Tolerance. Antioxidants. 2022; 11(6):1168. doi: 10.3390/antiox11061168.
3. Liu J , Zhang J , Ma G , et al. Melatonin improves rice salinity stress tolerance by NADPH oxidase-dependent control of the plasma membrane K+ transporters and K+ homeostasis[J]. Plant, Cell & Environment, 2020. doi: 10.1111/pce.13759.
4. Liu Y, Yu Y, Sun J, et al. Root-zone-specific sensitivity of K+-and Ca2+-permeable channels to H2O2 determines ion homeostasis in salinized diploid and hexaploid Ipomoea trifida. J Exp Bot. 2019 Feb 20;70(4):1389-1405. DOI: 10.1093/jxb/ery461.