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根GORK保钾机制检测
经典案例
J Exp Bot 江苏师范大学：多倍体维持钠钾稳态促耐盐能力的新机制
Tree Physiol 中国林科院张华新、杨秀艳：NMT发现白刺通过维持叶肉排Na+保K+能力及H+泵活性来适应盐胁迫
推荐实验设备
NMT耐盐机制分析仪（NMT300-SMP-YG/XY）
实验意义
探究耐盐材料的保钾机制，是否与GORK（外向K+通道）的调控有关。盐胁迫下，保钾能力越强，即K+外排越小，且H+外排相对较大，代表该耐盐材料在盐胁迫下，通过提升质膜H+-ATPase活性，加大向胞外排H+，缓解因盐胁迫引起的质膜去极化，从而抑制质膜去极化激活的GORK，减少K+外排，实现保钾。
检测指标
K+、H+
样品培养及处理
苗龄
苗龄无强制要求。该实验使用苗期样品较多，常见样品苗龄参考：
拟南芥：1~4周
水稻：1~5周
烟草：1~3周
杨树：4~7周
棉花：1~4周
培养方式
水培、琼脂培养基、土培、沙培均可，推荐使用水培和琼脂培养，其次是沙培和基质较松散的土培。
实验处理
100~400 mM NaCl处理24小时。NaCl或Na2CO3+NaHCO3浓度与您该课题的其它实验胁迫浓度保持一致。常见样品胁迫浓度参考：
拟南芥、水稻、烟草：100~150 mM NaCl
棉花：200 mM NaCl
样品选取
1.植株选取
选取状态良好且外观形态在组内占主流的植株
2.根选取
1）主根或侧根均可，同一研究需保持一致，即都是主根或都是侧根
2）同一组内，根长、根直径、根颜色尽量一致
3）优先新生根或嫩根
检测流程
前处理
1.将盐碱处理后的样品取出，使用滤纸条和样品固定专用树脂块将样品的一条根，按压固定在培养皿底部。体积较小样品，可整株置于培养皿中；如体积较大，剪取目标根并固定好。
样品固定
2.加入测试液浸没根，静置30min，不同规格的培养皿对应加入测试液体积：
35/60/90 mm培养皿，分别对应4/10/40 mL测试液。
样品前处理视频
检测过程
1.检测位点：
K+：根伸长区。距离根尖顶点4d的位置，d=根直径H+：根成熟区。距离根尖顶点5000μm的位置
2.检测时长：5-10分钟
3.重复数：n≥8，即每组检测不少于8条根。如同一株样品有多条根符合检测要求，可在同一株上取不止1条根，一组内使用的植株数不可少于3株。
耗材清单
胁迫浓度＜250 mM 测试液：150 mM NaCl, 1.0 mM KCl, 0.2 mM MES, pH5.8
胁迫浓度≥250 mM 测试液：300 mM NaCl, 1.0 mM KCl, 0.2 mM MES, pH5.8
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检测参数
1.物镜倍数：4倍（根直径≥200μm）；10倍（根直径＜200μm）
2.采样规则：X-30
3.传感器--样品表面距离：5μm
参考文献
1.许越.非损伤微测技术—2022[J].NMT通讯,2023(01):3-9.DOI:10.5281/zenodo.8227586.
2.Liu B, Feng C, Fang X, et al. The anion channel SLAH3 interacts with potassium channels to regulate nitrogen-potassium homeostasis and the membrane potential in Arabidopsis. Plant Cell. 2023 Jan 19:koad014. doi: 10.1093/plcell/koad014.
3.Sun Z, Li J, Guo D, et al. Melatonin enhances KCl salinity tolerance by maintaining K+ homeostasis in Malus hupehensis. Plant Biotechnol J. 2023 Jul 19. doi: 10.1111/pbi.14129.
4.Al Nayef M, Solis C, Shabala L, et al. Changes in Expression Level of OsHKT1;5 Alters Activity of Membrane Transporters Involved in K+ and Ca2+ Acquisition and Homeostasis in Salinized Rice Roots. Int J Mol Sci. 2020 Jul 10;21(14):4882. doi: 10.3390/ijms21144882.