氮高效机制：“胞浆-液泡”氮分配检测

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经典案例

Plant Physiol：湖南农大张振华组NMT在稻油轮作养分高效利用机理上的应用

 

推荐实验设备

NMT植物养分高效机制分析仪（NMT300-NMP-YG/XY）

 

实验意义

探究低氮环境下，氮高效材料的氮高效利用机制，是否与该材料细胞，将更多的NH₄⁺、NO₃^-分配到胞浆有关。根、茎、叶的液泡排NH₄⁺、NO₃^-相对较强，或吸NH₄⁺、NO₃^-相对较弱，代表该材料可能是通过该机制提升氮素利用率。

 

检测指标

NH₄⁺、NO₃^-

 

 

样品培养及处理

苗龄

苗龄无强制要求。该实验使用苗期样品较多，常见样品苗龄参考：

拟南芥：1~4周

水稻：1~5周

烟草：1~3周

杨树：4~7周

棉花：1~4周

 

培养方式

水培、琼脂培养基、土培、沙培均可，推荐使用水培和琼脂培养，其次是沙培和基质较松散的土培。

 

 

样品选取

1.植株选取

选取状态良好且外观形态在组内占主流的植株。

2.根、叶片、茎选取

状态良好且外观较为一致。

 

检测流程

前处理

1.在35mm培养皿中滴入一滴测试液，使用镊子将固定样品玻片放置到培养皿中，并压一下玻片使其贴在皿底。

2.吸取100μL液泡悬液，滴入到35mm培养皿中的固定样品玻片中心处，静置10分钟，

3.向培养皿中缓慢加入4mL测试液，再吸出弃去。

4.再次缓慢加入4mL测试液，静置10min。

 

样品前处理视频

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检测过程

1.检测位点：液泡表面

2.检测时长：5-10分钟

3.重复数：n≥10，即每组检测不少于10个液泡。如同一培养皿中有多个液泡符合检测要求，可在同一培养皿中检测不止1个液泡。

 

耗材清单

测试液：

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检测参数

1.物镜倍数：20倍

2.采样规则：X-10

3.传感器--样品表面距离：2μm

 

参考文献

1. 许越.非损伤微测技术—2022[J].NMT通讯,2023(01):3-9.DOI:10.5281/zenodo.8227586

2. Han YL, Song HX, Liao Q, et al. Nitrogen Use Efficiency Is Mediated by Vacuolar Nitrate Sequestration Capacity in Roots of Brassica napus[OPEN]. Plant Physiology. 2016 Mar;170(3):1684-98. doi: 10.1104/pp.15.01377.