O-Sense
植物叶肉模式免疫（PTI）实时Ca2+信号检测
经典案例
Nature东英吉利大学Zipfel：无损“电生理”钙流为气孔免疫钙通道OSCA1.3的鉴定提供关键证据
Cell Res万建民院士：无损“电生理”钙流为CNGC9介导PAMP激活钙通道促水稻抗病提供关键证据
推荐实验设备
Physiolyzer® （NMT300-PYZ-XY)
实验意义
检测干旱胁迫下的Ca2+实时跨膜吸收（内流）速率
检测指标
Ca2+
样品培养及处理
苗龄
苗龄无强制要求。该实验使用苗期样品较多，常见样品苗龄参考：
拟南芥：1~4周
水稻：1~5周
烟草：1~3周
杨树：4~7周
棉花：1~4周
培养方式
水培、琼脂培养基、土培、沙培均可。
样品选取
1.植株选取
选取状态良好且外观形态在组内占主流的植株。
2.叶片选取
1）根据您的研究需求，选择植株上特定位置的叶片，例如从下往上数的第x片叶片。部分研究可能无此要求，同一研究的叶片选取标准需保持一致。
2）同一组内，叶龄、叶片颜色、大小尽量一致
3）优先完整无损伤的叶片
检测流程
前处理
1.从目标叶片上剪取1cm*1cm的叶片组织，揭去叶片组织的下表皮，暴露叶肉组织。如果叶片面积较小，直接用整片叶片。
叶片暴露叶肉组织
2.对折叶片，叶片下表面朝外，让暴露出叶肉组织处于外侧弯折面处，使用铝箔条将远离弯曲面的叶片组织条尾部夹住，使用样品固定专用树脂块将样品压在培养皿底部，露出叶片弯折处的叶肉组织。
叶肉细胞样品固定
3.加入测试液浸没叶片，静置2小时，不同规格的培养皿对应加入测试液体积：
35/60/90 mm培养皿，分别对应4/10/40 mL测试液。
样品前处理视频
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检测过程
1.先检测Flg22处理前的信号，再瞬时加入1mL Flg22处理液母液（5x Flg22, 1.0 mM NaCl, 0.1 mM KCl, 0.1mM CaCl2, 0.2 mM MES, pH5.8）后检测处理后信号。Flg22处理液母液中的Flg22浓度，为Flg22处理终浓度的5倍。该实验常用Flg22终浓度为0.01~10 μM。
2.检测位点：叶肉细胞表面
3.检测时长：Flg22处理前5分钟，Flg22处理后10-20分钟
4.重复数：n≥8，即每组检测不少于8块叶片组织。如同一株样品有多片叶片符合检测要求，可在同一株上取不止1片叶片，也可在同一片叶片上取不止1块叶片组织，一组实验使用的植株数不可少于3株。
耗材清单
测试液：1.0 mM NaCl, 0.1 mM KCl, 0.1mM CaCl2, 0.2 mM MES, pH5.8
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检测参数
1.物镜倍数：4倍
2.采样规则：X-30
3.传感器--样品表面距离：5μm
参考文献
1. 许越.非损伤微测技术—2022[J].NMT通讯,2023(01):3-9.DOI:10.5281/zenodo.8227586.
2. Guo S, Zhang Y, Li M, et al.TaBln1, a member of the Blufensin family, negatively regulates wheat resistance to stripe rust by reducing Ca2+ influx. Plant Physiol. 2022 Mar 14:kiac112. doi: 10.1093/plphys/kiac112.
3. Yu X, Xie Y, Luo D, et al.A phospho-switch constrains BTL2-mediated phytocytokine signaling in plant immunity. Cell. 2023 May 25;186(11):2329-2344.e20. doi: 10.1016/j.cell.2023.04.027.