Bone :山西医科大第二医院丨DAla2GIP抑制钙吸收拮抗软骨细胞凋亡(附NMT实验体系)



期刊:Bone
主题:DAla2GIP抑制钙吸收拮抗软骨细胞凋亡
标题:DAla2GIP antagonizes H2O2-induced chondrocyte apoptosis and inflammatory factor secretion
影响因子:4.360
检测指标:Ca2+流速
检测样品:7日龄小鼠,1.0ml乙醚麻醉后处死,第三代胸部软骨组织细胞
Ca2+流实验处理方法:Control,300μM H2O2 ,100pM DAla2GIP 和 300μM H2O2 + 100pM DAla2GIP
Ca2+流实验测试液成份:
作者:山西医科大学第二医院卫小春、王宇泽

英文摘要

To investigate the protective effects of DAla2GIP against the apoptosis and inflammatory factor secretion in H2O2-induced chondrocyte, and explore the possible mechanisms of DAla2GIP underlying its protection.

The chondrocytes were divided into the following four groups: Control, 300 μM H2O2, 100 pM DAla2GIP and 300 μM H2O2 + 100 pM DAla2GIP. The apoptosis of chondrocyte was measured by using mitochondrial membrane potential assay kit (JC-1) and TUNEL assay, the inflammatory factor secretion were assessed by ELISA assay, and the cellular and molecular mechanisms of DAla2GIP protection were investigated by using Real time-PCR, flow cytometry, Non- invasive calcium detection and western blotting techniques.

(1) DAPla2GIP prevents apoptosis of chondrocyte induced by H2O2. (2) DAla2GIP alleviated the inflammation of chondrocyte induced by H2O2. (3) DAla2GIP prevents chondrocyte apoptosis by inhibiting calcium influx of chondrocyte and regulating expression of Bcl-2 and Caspase-3induced by H2O2. (4) DAla2GIP inhibited the H2O2 mediated inflammation by up- regulating the expressions of Sox9 and Col2a1 and inhibiting PI3K/Akt/NF-κB pathway.

Our experimental results revealed that DAla2GIP prevents chondrocyte apoptosis by inhibiting calcium influx of chondrocyte and induced regulating expression of Bcl-2 and Casp ase-3by H2O2. Further, molecular biology experiments confirmed that DAla2GIP inhibited the H2O2 mediated inflammation vis up-regulating the expressions of Sox9 and Col2a1 and inhibiting PI3K/Akt/NF-κB pathway. The results demonstrate that DAla2GIP has protective properties in H2O2-induced chondrocyte injury, this finding shows that novel GIP analogues have the potential as a novel therapeutic for osteoarthritis patients.

 

中文摘要(谷歌机翻译)

研究DAla2GIP对H2O2诱导的软骨细胞凋亡和炎性因子分泌的保护作用,并探讨DAla2GIP保护其的可能机制。

软骨细胞分为以下四组:对照组,300μmH2O2、100μmM DAla2GIP和300μmH2O2n +100μpMDAla2GIP。用线粒体膜电位分析试剂盒(JC-1)和TUNEL法检测软骨细胞的凋亡,用ELISA法评估炎性因子的分泌,并通过实时PCR研究DAla2GIP保护的细胞和分子机制,流式细胞仪,无创钙离子检测和蛋白质印迹技术。

(1)DAPla2GIP可防止H2O2诱导的软骨细胞凋亡。(2)DAla2GIP减轻了H2O2诱导的软骨细胞炎症。 (3)DAla2GIP通过抑制软骨细胞的钙内流并调节过氧化氢诱导的Bcl-2和Caspase-3的表达来防止软骨细胞凋亡。(4)DAla2GIP通过上调Sox9和Col2a1的表达并抑制PI3K / Akt /NF-κB通路来抑制H2O2介导的炎症。

我们的实验结果表明,DAla2GIP通过抑制软骨细胞的钙内流并诱导H2O2调节Bcl-2和Casp ase-3的表达来防止软骨细胞凋亡。此外,分子生物学实验证实,DAla2GIP通过上调Sox9和Col2a1的表达并抑制PI3K / Akt /NF-κB通路来抑制H2O2介导的炎症。结果表明,DAla2GIP在H2O2诱导的软骨细胞损伤中具有保护性,这一发现表明,新型GIP类似物具有作为骨关节炎患者的新型治疗剂的潜力。

 

结果表明:100 pM DAla2-GIP组和Control组的Ca2+吸收速率并无显著差异,平均值分别是1.94 pmol·cm-2·s-1和1.42 pmol·cm-2·s-1;经300 μM H2O2处理后,Ca2+吸收速率明显增加,平均值为139.61 pmol·cm-2·s-1;经300 μM H2O2和100 pM DAla2-GIP共同处理后,Ca2+吸收速率明显低于300 μM H2O2处理组,平均值为26.68 pmol·cm-2·s-1,说明DAla2-GIP抑制了H2O2诱导的Ca2+吸收。而Ca2+吸收是软骨细胞凋亡早期的标志。

文章链接:https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S8756328219302091?via%3Dihub

 

 

中关村NMT联盟全国测试服务网络测试服务信息

4月8日,某研究所将NMT技术应用于钙信号研究,测试样品为小麦,测试指标为Ca2+,在旭月研究院完成实验。| 5月9号,某研究院将NMT技术应用于逆境生理领域,测试样品为黄瓜幼苗,测试指标为NO3-、NH4+,在旭月研究院完成实验。| 6月2号,某研究院将NMT技术应用于逆境胁迫领域,测试样品为棉花苗,测试指标为Ca2+、H+、K+、Na+、IAA,在旭月研究院完成实验。| 6月5号,某研究院将NMT技术应用于植物逆境领域,测试样品为苜蓿,测试指标为K+,在旭月研究院完成实验。| 6月9号,某研究所将NMT技术应用于水稻逆境领域,测试样品为水稻,测试指标为Na+、Ca2+,在中国科学院植物研究所完成实验。| 6月11号,某研究院将NMT技术应用于植物抗逆领域,测试样品为酵母细胞,测试指标为IAA,在旭月研究院完成实验。| 6月16号,某高校将NMT技术应用于昆虫研究,测试样品为昆虫,测试指标为Ca2+、K+,在旭月研究院完成实验。| 6月19号,某研究院将NMT技术应用于植物抗逆领域,测试样品为拟南芥,测试指标为Ca2+,在旭月研究院完成实验。|