抗盐基因功能分析| 抗盐种质资源研究

摘要

1、表型研究
1）定量检测样品排/吸Na⁺速率，直接表征 Na-H 逆向转运体、Na-H 交换体活性，验证SOS1、NHX1 等功能
2）定量检测样品失K⁺速率，直接表征其综合耐盐保K⁺能力
3）定量检测活体样品内外部不同位置的Na⁺、K⁺浓度

2、机制研究
1）保K⁺机制
a. 外向K⁺通道（GORK）耐盐保K⁺贡献率
定量检测盐胁迫下的排H⁺速率，结合其保K⁺能力，判断耐盐/保K⁺能力强的样品，其保K⁺机制是否是通过活跃的PM H⁺-ATPase 排H⁺，促盐胁迫下质膜复极化，关闭GORK，从而达到保K⁺效果
b. 非选择性阳离子通道（NSCC）耐盐保K⁺贡献率
以K⁺外排速率为落脚点，从激活NSCC的关键信号ROS及ROS胞内胞外产生的途径，利用RBOHs突变体、RBOH抑制剂、胞内ROS清除剂等，验证是否通过调节NSCC实现保K⁺及其调节机制
2）质子泵 H⁺-ATPase
检测盐胁迫下的实时排H⁺速率，用最直接的指标定量表征盐胁迫下H⁺-ATPase活性提升的程度
3）Ca²⁺信号转导
以排/吸Na⁺速率、失K⁺速率为落脚点，结合Ca²⁺通道抑制剂、Ca²⁺螯合剂、外源Ca²⁺，以及Na-H逆向转运体抑制剂、Na-H交换体抑制剂、K⁺通道抑制剂、H⁺-ATPase 抑制剂，辅以外源 ROS，验证Ca²⁺信号是否参与了促植物排 Na⁺、液泡区隔Na⁺、保K⁺等过程，以及这一过程中的Ca²⁺信号转导机制